大提柱式質(zhì)粒DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理,再通過離心吸附柱,專一結(jié)合DNA,zui后洗去雜質(zhì),快速提取質(zhì)粒DNA,全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從50-100 mL過夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)300-500 ug的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測序及PCR等。
1. 快速、步驟少,整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。
2. 純度高,采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。
3. 產(chǎn)量高,每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 ug/mL。
4. 用途廣,適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。
5. 價(jià)格低,比多數(shù)國內(nèi)同類產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。
規(guī)格及成分 成 份 5次包裝 10次包裝
溶液A 30 mL 60 mL
溶液B 30 mL 60 mL
RNase A溶液(10mg/mL) 0.3 mL 0.6 mL
溶液C 40 mL 80 mL
大提離心吸附柱 5套 10套
通用洗柱液 100 mL 200 mL
DNA洗脫液2.0 10 mL×2 50 mL
使用手冊 1份 1份
運(yùn)輸及保存 RNase A溶液需要-20℃保存,其余成分可室溫或4℃保存,如有沉淀可加熱溶解后再使用。
自備試劑 無。
使用方法 1. 用250 mL離心管收集100-300 mL菌液,5000 rpm 離心10分鐘,去除上清。
2. 往細(xì)菌沉淀中加入6 mL溶液A,充分振蕩懸?。?次使用時(shí)需要將RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均勻,未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存)。注意:充分重懸細(xì)胞沉淀使之無細(xì)胞結(jié)塊狀物對于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。
3. 加入6 mL 溶液B,溫和翻轉(zhuǎn)10 余次至透明。若混合液不透明,應(yīng)減少細(xì)菌的用量或室溫放置5-10分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩,否則細(xì)菌基因組DNA將斷裂為小片段,與質(zhì)粒難以分離,污染質(zhì)粒DNA。
4. 加入冰浴的8 mL 溶液C,顛倒混勻,冰上放置10分鐘?;旌衔镏袑⒂邪咨鯛钗镄纬?。注意不要過分振蕩。
5. 6000 rpm離心10分鐘。如果離心管承受能力強(qiáng),離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。
6. 將上清液(約20 mL)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,放入50 mL 套管中。
7. 6000 rpm 離心5 分鐘,質(zhì)粒DNA將與離心吸附柱中的膜結(jié)合。棄穿透液。
8. 將10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中,室溫靜置2 分鐘后6000 rpm 離心5分鐘,棄穿透液。
9. 重復(fù)上步一次,即將10 mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中,室溫靜置2 分鐘后6000 rpm 離心5分鐘,棄穿透液。
10. 室溫6000 rpm 空甩5分鐘,棄穿透液。注意:此步對去除殘留通用洗柱液很重要,否則通用洗柱液會(huì)影響DNA的使用。
11. 將離心吸附柱放入一個(gè)自備的、干凈的50 mL塑料離心管中,加1 mL DNA洗脫液2.0(洗脫液如加熱到50-65℃效果更佳),室溫靜置2分鐘后6000rpm 離心5分鐘,收集液即是質(zhì)粒DNA溶液。
12. 本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強(qiáng),所以再用1 mL DNA洗脫液2.0洗脫3-4次才能把絕大部分質(zhì)粒DNA洗脫下來。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注:如果DNA洗脫液不夠,可以用自備的DEPC水代替。注:一般情況下,*次洗脫可以洗脫約25%的質(zhì)粒DNA;第二次洗脫可以洗脫約35%的質(zhì)粒DNA;第三次洗脫可以洗脫約20%的質(zhì)粒DNA;第四次洗脫可以洗脫約10%的質(zhì)粒DNA;第五次洗脫可以洗脫約8%的質(zhì)粒DNA。
13. 合并所得質(zhì)粒DNA,立即使用或-20℃儲(chǔ)存。如果需要使用液相內(nèi)毒素清除劑清除質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素,可以直接將此步所得的DNA溶液用于去內(nèi)毒素處理。如果DNA濃度太低,可以另購本公司的核酸濃縮劑進(jìn)行濃縮。