玫瑰花環(huán)試驗,又稱為花結(jié)試驗。是測定淋巴細胞數(shù)量和功能的一種方法。
人類T和B淋巴細胞表面具有不同的受體。由于人類T淋巴細胞表面具有與綿羊紅細胞結(jié)合的受體,能與綿羊紅細胞非特異性結(jié)合,形成E花環(huán),因此,T細胞也成為紅細胞花瓣形成細胞。根據(jù)E—玫瑰花環(huán)形成率,可以間接判斷機體細胞免疫力。目前,已廣泛應(yīng)用于臨床,作為測定人群免疫狀態(tài)的一個指標。
材料:
1.肝素(100單位/毫升)
2.0.5%兔紅細胞懸液(用Hanks液配制)
3.吸收過的胎牛血清:
取經(jīng)56℃30分鐘加熱滅活后的胎牛血清加半量壓積兔紅細胞混合后,37℃水浴20分鐘,2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取上清液即成。
4.Hanks液
5.豚鼠抗凝血
6.淋巴細胞分層液
7.滅菌注射器,針頭,試管,吸管等。
方法:
1.淋巴細胞提取
(1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀釋。加于3毫升淋巴細胞分層液液面之上。
(2)2000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘,吸淋巴細胞層到另一試管中加5倍體積的Hanks液洗1—2次,(1500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘)棄上清即成。
1. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔紅細胞懸液0.2毫升,于淋巴細胞中?;旌虾螅?7℃水浴5分鐘。
2. 500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,放4℃冰箱中2小時后,棄大部分上清。
3. 染色及觀察輕輕懸浮沉積的細胞。向懸液中滴一滴美蘭液,混合,10分鐘后取一滴放載玻片上,加蓋玻片鏡檢。高倍鏡或油鏡下計數(shù)200個淋巴細胞,凡結(jié)合3個或3個以上的兔紅細胞者為陽性,計算花環(huán)形成細胞的百分率。