檢測試劑盒在實際測定操作中要注意以下幾點
檢測試劑盒原理,DNA包被特殊處理帶有高DNA親和性的微孔板上,8-OHdG通過捕獲抗體和檢測抗體來檢測.通過酶標(biāo)儀可以檢測結(jié)果.大量得8-OHdG與光密度值成比例。
檢測試劑盒實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
實驗原理:本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。向預(yù)先包被了抗體的酶標(biāo)孔中加入樣本,再加入生物素標(biāo)記的識別抗原,在三十七度下孵育三十分鐘,兩者與固相抗體競爭結(jié)合形成免疫復(fù)合物,經(jīng)PBST洗滌除去未結(jié)合的生物素抗原,然后加入親和素-HRP,親和素-HRP與生物素抗原結(jié)合,洗滌后結(jié)合的HRP催化TMB成藍(lán)色,隨后在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色,在一定波長下有吸收峰,吸光值與樣本中抗原的濃度成負(fù)相關(guān)。
檢測試劑盒具有敏感性高,特異性強,快速等特點,目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌殘留檢測,該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多,其中任何一步控制不好都可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,在實際測定操作中要注意以下幾點。
1.試劑盒回溫
檢測試劑盒為冷藏(2℃-8℃)保存。從冰箱拿出來后,先不要急于打開試劑盒,要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無冷凝水,檢測所用的試劑需充分混勻且*溶解后再用,提前1~2小時取出試劑盒,放在室溫中;或在預(yù)設(shè)25℃恒溫培養(yǎng)箱中平衡30分鐘~60分鐘。
2.環(huán)境溫度的控制
1)實驗室應(yīng)配備溫濕度表,且確保定期計量。
2)根據(jù)天氣情況設(shè)定實驗室空調(diào)制冷或加溫功能,待室溫穩(wěn)定且無干擾的條件下再開始檢測流程。
3)選用帶溫控裝置的孵育儀器,如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。注意要提前開啟預(yù)熱。