動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞分離液的注意事項(xiàng)
細(xì)胞分離液使用的注意事項(xiàng):
1.開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產(chǎn)品,為延長分離液保存時(shí)間,請?jiān)跓o菌條件下啟封,避免微生物污染。。
2.分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫(18℃~25℃),如室內(nèi)溫度較低,可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
3.血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血2 h以內(nèi)),為保持淋巴細(xì)胞的活性,應(yīng)避免冷凍和冷藏。
4.稀釋血液或洗滌細(xì)胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,大大降低細(xì)胞得率及純度。
5.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁影響分離效果。
6.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會影響分離效果,可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,摸索最佳的分離條件。
7.吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加;吸取過多的血漿層可能會導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。
8.如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),那在收集血液和分離過程中,注意無菌操作,避免微生物污染。
9.不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。