ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)土壤/植物樣本的處理方法
植物標(biāo)本的精采集及保存
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
3、 于4度,8000rpm,離心1小時(shí),取上清;
4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yimi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈桑4鎮(zhèn)溆茫?/p>
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時(shí)保存于4度待用。
6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測(cè)定:(粗提取)
1、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心ィ?/p>
2、 加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),3、 請(qǐng)于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時(shí)保存于4度待用。
土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測(cè)分泌蛋白,直接取上清檢測(cè),測(cè)試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。