elisa試劑盒白介素類從小鼠腹水中純化抗體常是單克陛抗休緩沖液溶解 ,用50信體積的上述緩沖特 征鑒定,應(yīng)用 中的一 個重 要 步驟 。 目 析 ,然后 離心 取 上清 液。 即為正 辛 酸純化
前zui 常用的方 法為離子 交換 層析 法, 但該法 物 。
既不 適于多 種細胞及 腹水 同時純 化鑒定 ,也 =, DEAE-22柱 層 析:DEAE一22甩
不 適 于大規(guī)模 ,且 洗脫 液 中抗體 含量較 常 規(guī)方 法處 理 ,以含 0.02M NaG】的 0.02M
低 ,常需 濃縮后才 能 使 用。近 來 ,ReLk M pH7.4Tris-HC1平 衡。
(1987)等 報導 了正辛酸 純化法 。本 實驗 室 在 3D o虞 水 2ml對 含 0.02世 NaG】的
從 腹水 純 化抗 HaG單克 隆抗 體 中,用正 辛 0.02 pⅡ7.4Tr~s-HC1攪 拌透 析 4小 時,
酸 法與 DEAE 柱 層析進 行對照 、分析 ,結(jié)果 上拄 ,以分 別 含 0.02M ,0.04 ,0.06皿 ,
elisa試劑盒白介素類顯示了正 辛酸法有快 速 、簡便 ,抗 體濃 度高 , 0.08 ,0.10M ,0.12M ,0.15M NaC1的
適 臺大量 的優(yōu) 點 一 0.02世 pE[7一 Tris-HC1梯 度 洗 脫 ,流 速腹 水1分泌抗 ~-HCG單 克 隆 一計 (ShimadzuuV一24o)上讀 OD280,把 0
抗體雜交瘤移植于 BALB/c小鼠腹腔 的 滲 值太子 0.1者 ,臺并,即為 DEAE 純化物。
出液 ,抗體球蛋 白類 型為 IgG 。 , 三 ,抗體 純 窿的鑒 定 ;(- ~ELISA法 t
二、DEAE-22柱I2x25emo … 。。 在聚輦 乙烯塑料 小 杯 條 上 ,每 孔 加 i00
三 、正 辛酸 :上海 化荊 商店 。 H.CG.溶液 (1~glm1),置 4~C,24小 時 ,以洗
四、聚 苯乙烯 8聯(lián)小杯 條 :美 國 :Dyne- 滌液 (0.02M Tris-HC1pH7.4)洗滌三 次 ,
tech公 司產(chǎn) 品。 . . 吸 干。將 =種純化 物與原 腹水分別 校正濃度
五、免抗 鼠 IgG 辣根過 氧化 物 酶 標 記 至 ]lJg/ml,然 后撬 比稀 釋 ,在每 孔蜘 100/~1,
物:實驗 室 自制 。 置 37。C2小時 ,同液洗滌三 次 ,吸干 ,每孔船
, . . 兔 抗 鼠 IgG-酶標 記物 溶液 100 ,置 37~0,
/J 1. 5小 時 ,洗 滌 三 次 (同 上 ),吸 干 ,各 孔船、 正辛酸純化 法。3D,。腹永 2ml,加 入 新鮮酉己制的鄰苯 =胺一過 氧化 氫底 物 溶 液
4m10.06M pH4醋酸緩 沖 液 ,校 正 pH 至 100/.~1,置 37'015分鐘 ,加 2M Ⅱ SO 100
4.8,在 振蕩下滴加 正 辛酸 60 ,室溫 中混和 終止反應(yīng) ,在簿標 比色計 (Dynatech)上 讀取
30分鐘 ,離心 (4,O00i'pm ,30分 鐘 50),取 OD值 。
一 }二層 液 ,對 50倍體 積 pH7一 PB (137raM (= > 電泳 l
NaG1, 2.6mM lKG】, 10mM KH,PO4 1.醋 酸 纖 維 索 薄 膜 電 泳:正 辛 酸
NaⅡPo.,0.2mM EDTA)在 4。G攪拌 透析 DEAE--22純 化物分別 以 2p,l(2mg/m1),原
6小時,中間更換透析液 2次,然后加入等休 腹水 l 加樣于醋酸纖維索薄膜,電泳液:‰
積 的飽和硫酸 銨溶液 ,elisa試劑盒白介素類置 4。030分 鐘 ,離心 — —
(4,O00rpm 20分鐘 )取 沉淀 ,加 2ml上述PB ·